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复苏细胞应采用快速融化的方法

发布时间:2018-06-12 17:12 来源:未知 编辑:admin

  2. 取对数发展期的细胞,用胰卵白酶把单层发展的细胞消化下来,细胞冻存液悬浮发展的细胞则间接将细胞移至 15 ml 离心管中。

  1. 仪器:净化工作台、离心计心情、恒温水浴箱、冰箱(4℃、-20℃、-70℃)、倒置相差显微镜、培育箱、液氮冰箱。

  3. 塑料器皿:吸头、枪头、胶塞、移液管(10 ml)、15 ml 离心管、冻存管(1~2 ml)。

  5. 试剂:D-Hanks 液、小牛血清、培育液、双抗(青霉素、链霉素)、胰卵白酶(0.08%)、1NHCl、7.4% NaHCO3、DMSO(阐发纯)或无色新颖甘油。

  2. 玻璃器皿:吸管(弯头、直头)、培育瓶、玻璃瓶(250 ml、100 ml)、废液缸。

  细胞冻存的根基准绳是慢冻快融,如许能够最大限度的保留细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作庇护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上迟缓冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,削减细胞内冰晶的构成,从而削减因为冰晶构成形成的细胞毁伤。

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  苏醒细胞应采用快速融化的方式,如许能够包管细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免因为迟缓融化使水分渗入细胞内构成胞内再结晶对细胞形成毁伤。

  细胞冻存和苏醒能够:(1)用于生物学保种;(2)用于医学上干细胞研究;(3)用于传代培育。

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